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HPLC (高速液体クロマトグラフィー) の基礎知識とトラブルとその対処法

HPLC (高速液体クロマトグラフィー) の基礎知識とトラブルとその対処法

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概要

本セミナーでは、HPLCの基礎から解説し、乱れたピークの判別、ピークが乱れる要因と対処法等、熟練者のデータ解釈の考え方、経験に裏打ちされた分析条件設定のコツを解説いたします。

開催日

  • 2023年5月19日(金) 10時30分 ～ 16時30分

修得知識

  • HPLCの具体的な装置と流路
  • 試料前処理の仕方、溶離液の作成方法
  • HPLCのメンテナンスの技法
  • HPLC装置の日常保守点検法
  • 実験中に起こるトラブルと対策・未然防止策

プログラム

　HPLCの基礎知識 (分離の簡単なメカニズムも含む) とHPLC装置フロー図を示し、装置の流路、機器を解説し理解度を上げる。次に日々の実験中に起こるHPLCのトラブルについて詳しく説明する。頻度の高いものと1年に数回、起こるものとに分けて解説する。そのトラブルの対処方法を具体的に例を上げて詳しく説明する。具体的な分析例を挙げ、日々の業務でHPLCをうまく使いこなすには、どのような技術が必要かを念頭に置いて具体的な技術について解説して行く。HPLC活用しての実験者が安心してHPLCを使いこなせるようになる事を目指し、セミナーを行う。

  1. 第1部 HPLCの基礎及び装置フロー図の理解と分離の簡単なメカニズム
    1. HPLC装置の構成と流路とフロー図
      1. HPLCのフロー図による解説
      2. 機器接続法
      3. 構成機器のチェック技法
      4. HPLCの安定化に関して
        • ポンプ 注入器
        • 検出器
        • オートサンプラー
        • レコーダー
        • グラジエントミキサー
        • フラクションコレクター
    2. 分離カニズム
      1. 吸着クロマトグラフィーの解説
      2. 分配クロマトグラフィーの解説
      3. イオン交換クロマトグラフィーの解説
      4. ゲル濾過クロマトグラフィーの解説
      5. アフィニテイークロマトグラフィーの解説
    3. 汎用されるカラム種類とカラム選定技法
      1. 吸着用カラム
      2. 逆相分配用カラム
      3. イオン交換用カラム
      4. ゲル濾過用カラム
    4. 溶離液作製法と試料前処理技術
      1. 溶離液作製法
      2. サンプルの不純物、微細物の除去技術
      3. 溶離液の作製法
        • 緩衝液の作製法
        • pH調整液の作製法
        • ODS系カラムの溶離液の作製法
      4. 溶離液の保存法 (腐敗防止)
      5. 分液ロート、遠心分離機の利用法
      6. HPLC フィルターの使用法
      7. 濾紙とガラスフィルターの利用法
      8. 攪拌機の利用 (特に緩衝液作成時)
      9. pHの調整法と内部標準液の交換法
  2. 第2部 HPLCで日常起こりやすいトラブルとその具体的な改善法
    1. HPLCの実験中にミスをしない工夫
      1. 実験前に準備するもの
        • キムワイプ
        • キッチンペーパー
        • 器具
      2. 実験台に関して
        • 試料溶液のこぼれ防止
        • 試料のコンタミの防止
      3. 試料準備、溶離液の作製と確認、カラムの安定化
    2. 日常起こりやすいトラブル
      1. マイクロシリンジの詰まり
      2. オートサンプラーの詰まり
      3. 流路の詰まりと洗浄
      4. ラインフィルターの詰まり
      5. プレカラムの洗浄法
      6. ネジ山の故障
    3. 試料の保存方法と溶離液の保存方法
      1. 試料の保管方法
      2. 溶離液の腐敗
      3. サンプル瓶の洗浄と保管方法
    4. HPLC用カラムについて
      1. カラムのチェック
      2. カラム洗浄
      3. カラム接続法
      4. カラムの安定化法
    5. HPLCのトラブル改善法
      1. 駆動ポンプのトラブル a (チェッバルブ解体法)
      2. 駆動ポンプのトラブル b (ポンプシリンジの交換等)
      3. 溶離液中の脱酸素装置のトラブルと点検法
      4. ラインフィルターのトラブル (目詰まり処理)
      5. オートインジェクターのトラブル
      6. 汎用される検出器のトラブル
      7. 特殊な検出器のトラブル
      8. カラム恒温層のトラブル
      9. 付属装置のトラブル処理
      10. カラムの圧力上昇
    6. 日常保守点検
      1. HPLC装置の流路の洗浄に関して
      2. 使用後のカラムの洗浄と保管法
      3. インジェクターの洗浄
      4. サクションフィルターの洗浄
      5. 検出器の感度検査と洗浄
      6. プレカラムの圧力点検
      7. サクションフィルターの目詰まり点検
    7. 消耗部品の準備と保管方法
      1. チェッバルブ
      2. ラインフィルターとプレカラムフィルター
      3. 各種濾紙、試料フィルターと溶離液フィルター
        • 保管方法は専属のミニBOXにラベルを張り微生物が生えない場所に入れる事
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主催

株式会社 R&D支援センター
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